由于本文干货较多，信息量也比较大，建议大家先收藏，有时间可以多看两遍。正文涉及到理论的部分我会尽量多配几张图，以便大家理解。本文主要介绍方法开发过程可以改善峰形的办法。如果觉得本文还不错，请点赞鼓励下小编哦。别忘了在朋友圈分享，和大家一起学习吧~~~

峰形对称性的优劣对于峰形和分离度有很大的影响，从而影响分析结果的准确性。然而影响峰形异常的因素很多，各种形式的污染，系统中的死体积，以及色谱柱填料塌陷都有可能对峰形产生影响。先简述下导致峰形异常可能存在的系统因素有：

本文针对在系统正常的情况下，单纯从方法开发的角度，探讨液相方法和峰形之间的关系。我们以最常见的反相系统为例，流动相是常见的甲醇/乙腈/水组合，色谱柱是普通C18色谱柱，针对该种体系通过调整液相方法来改善峰形拖尾的问题。由于原理比较抽象，所以文章前半部分讲优化的方法，后半部分再说这样做的原理。

峰拖尾分两种：前延和后延。即主峰前拖尾和后拖尾两种情况。

图1 前延峰

过载 

 溶剂

缓冲盐

四氢呋喃

柱温

这个问题我在另一篇文章中也提到过，不过那个文章还没有发出来，想看的朋友可以关注北京雷台仪器公众号，我会在以后发布。

图2 拖尾峰

同样需要检查样品是否过载

在流动相中加酸

添加缓冲盐或者增大其浓度

在流动相中加入三乙胺

我总会想象三乙胺抱着硅羟基，带着胜利的微笑看着碱性分子失落走开的样子。哈哈哈。通常情况下，加入2%的三乙胺就会有显著的效果，有时候可能需要适当增大用量。需要注意的是：

以上是一些常见的改善峰形的优化方法。接下来掰扯下相关的原理。也是蛮有趣的。

主角是文中反复出现的硅羟基

众做周知，c18色谱柱填料本应该是C18 长链基团嘛，那硅羟基这个家伙为什么会存在于色谱柱中呢？

图3    C18 愤怒的看着硅羟基，硅羟基眼泪汪汪

原来，C18填料合成过程是C18的氯硅烷与硅胶表面的硅羟基反应，从而将C18长链键合在硅胶表面。然而，由于空间位阻的作用，只有约50%的硅羟基能够与C18长链结合，剩余的硅羟基还都自由而快乐的蜷缩在巨大的C18长链的夹缝中。由于硅羟基容易与样品分子产生次级保留效应引起拖尾，所以需要将游离状态的硅羟基反应或者屏蔽，处理掉这些“万恶之源”。通常的办法使用小分子硅烷与硅羟基反应，例如三甲基硅烷。

图4 C18填料合成原理

但是不管怎么说，三甲基硅烷还是比氢原子大得多，同样由于空间位阻的作用，三甲基硅烷也不能将所有的氢原子取代依然会有残存的硅羟基存在。硅羟基就是这么被存留下来的。

写到这里，怎么脑子里回想起《离歌》的旋律了……“想留不能留，才最寂寞~没说完温柔，只剩离歌~~~”

言归正传，相同的样品在不同色谱柱之上的拖尾不同，也就是由于接触硅羟基数量不同导致的。从填料合成的角度就是键合方式是否紧密，封尾是否彻底，紧密的键合和彻底峰封尾能够有效改善峰形。北京雷台仪器公司主要经营二手分析仪器的销售，维修以及实验室耗材物料的销售业务，其中就有不同规格的色谱柱。欢迎大家购买使用。

那么上述加酸加碱加缓冲盐改善峰形又是什么原理呢？

原来，样品之所以愿意与硅羟基结合是有原因的。

C18长链是非极性的，与样品分子之间的作用力只有微弱的范德华力。而硅羟基具有一定极性，与极性分子之间的力是一种静电作用力，这种作用力比范德华力强得多。由于硅胶表面有很多横七竖八的C18挡着，能够有机会和样品分子结合的机会也不是很多，少部分“幸运”的样品分子与残存的硅羟基产生作用（那个，又想到《千与千寻》里锅炉爷爷说：这是爱情的力量啊，哈哈，搞笑）。大部分样品分子均匀前移，少部分“转角遇到爱”的样品分子与硅羟基依依惜别，推迟被洗脱出来，从而导致拖尾。因此，拖尾的程度与硅羟基残余量和样品分子极性大小有关。所以前文提到，极性大的化合物容易产生拖尾。

那么加酸加碱加缓冲盐的意义就在于此了，它们可以抑制硅羟基或者样品分子离子化，或者抢先占据位点，从而减少样品分子与残存游离硅羟基的接触机会，进而改善峰形了。

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终于写完了，好累。其实还有一些关于PKa的知识点

想了解这面知识点的同学在下方留言，想看我再写

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