高效液相色谱仪简称HPLC,是一种常用的分离定量分析仪器,依靠高压输送流动相,将样品带入色谱柱,利用样品中不同组分在固定相和流动相之间分配、吸附能力的差异实现分离,再由检测器转换成电信号得到色谱图,完成定性、定量检测。
整机主要由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据采集系统几部分组成。高压输液泵负责稳定输送流动相,控制流量与压力;进样器把待测样品精准注入流路;色谱柱是核心分离部件,不同物质在柱内移动速度不一样,先后流出色谱柱;检测器将流出组分转化为信号,常见有紫外检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器;软件采集信号,绘出色谱图,依据出峰时间定性,峰面积定量。
基础测试流程,配制样品与流动相,流动相超声脱气,装好色谱柱。开机,开启泵、检测器,用流动相平衡色谱柱,待基线平稳。进样,样品随流动相进入色谱柱,各组分依次被分离、经过检测器,软件记录色谱峰。测试结束,按规范冲洗色谱柱,置换保存溶剂,关闭设备。
应用领域十分广泛,食品行业检测添加剂、农药残留;医药行业药品含量、杂质分析;环境领域水体污染物检测;化工、材料领域原料与成品纯度检验。
仪器日常重点维护,流动相优先选用色谱纯,水相流动相需要现配,防止微生物滋生。含缓冲盐流动相测试结束,一定要先用纯水置换盐分,再切换有机相冲洗色谱柱,避免盐结晶损坏填料。色谱柱严禁超压、pH超出耐受范围,避免颗粒样品直接进样,防止堵塞柱子。定期检查泵密封垫、单向阀,排查漏液、压力波动问题。
使用局限,样品需要能够溶解在流动相中,不挥发、受热易分解的样品更适合;对于性质极接近、难以分离的组分,需要更换色谱柱或者调整流动相体系。设备对环境洁净度有要求,粉尘、杂质容易磨损泵体、堵塞管路。
简单总结,高效液相色谱仪就是依靠高压液体作为载体,把混合物逐个分开,再定量检测各组分含量,是实验室理化检测中应用非常普遍的精密分析设备。