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从上次的文章中我们了解到，色谱柱有很多不同的尺寸，也有很多不同种类的填料。我们日常接触最多的就是硅胶基质的色谱柱了。由于键合相的不同，硅胶色谱柱有分为正向柱和反向柱。

正向硅胶色谱柱的填料主要是采用纯硅胶或者硅胶键合极性基团作为固定相，而选用的流动相大多都是正己烷这种非极性有机溶剂。由于正向色谱固定相的极性大于流动相，极性样品分子更容易与固定相结合，不容易被冲出来，所以在正向色谱中，同样的条件下，极性样品出峰更晚。

反向硅胶色谱柱的硅胶填料都键合了非极性基团，例如C18。与正向相对应的，反向色谱的固定相极性要小于流动相，于是同样的反向色谱条件下，极性越大的样品出峰越早。

接下来，我们就介绍下这两种色谱柱的使用，维护，以及活化的方法。也就是雷铁柱的生活方式，养生方法以及消沉状态的康复措施。

 

  使用前   

 

 

使用前要检查好色谱柱的使用条件，

新主柱子要进行相应的活化和平衡，同时做好相应记录。

适当的样品前处理也是很必要的。

1，检查色谱柱外观

2，了解色谱柱的基本信息，包括pH值范围、最高操作温度、最大操作压力等信息

1，  先不接柱子和色谱柱，将系统用纯水和纯甲醇/乙腈分别冲一下

2，  然后按照说明书，用10倍柱体积的流动相平衡色谱柱，压力线稳定后按说明书方法进行柱效测试，记录测试方法和结果，作为定期柱效测试参考值。

例如，首先用0.2ml/min的流速将色谱柱平衡过夜，然后将流速升高到1.0ml/min冲洗30分钟，平衡过程中，将流速缓慢地提高，直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡)，以便将色谱柱的填料充分平衡至最佳状态。

常见色谱柱柱体积汇总表

例如：250×4.6mm 的色谱柱柱体积为 4.2 ml，以 1 ml/min 流速10倍柱体积需要平衡 42 分钟

 

   使用中   

 

 

1，流动相pH、柱温、柱压等不能超过超过色谱柱的使用上限，注意色谱柱使用方向（视频配卫生间方向，尖叫），否则会缩短色谱柱使用寿命或使色谱柱造成损坏。多数色谱柱PH在2-8之间：PH小于2，会发生官能团解离；PH大于8，又会溶解硅胶。使用温度不超过60度。柱压不超过3800psi。

2 ，流动相要进行过滤（0.2um或0.45um）和脱气。水相流动相超过48小时要更换，同时清洗更换溶剂瓶。

3，要确保溶剂可以互溶。使用与色谱柱中溶剂不互溶的试剂，将会导致缓冲盐析出沉淀，这会对色谱柱造成永久损坏。所以应该始终检查溶解度。

例如，在使用流动相平衡色谱柱之前用5%-10%甲醇（乙腈）冲洗系统及色谱柱，确保系统及色谱柱中没有缓冲盐或较高的有机相，避免缓冲盐遇较高浓度的有机相析出。若使用双通道在线混合流动相，预先检查流动相各组分的兼容性，例如磷酸盐缓冲液与高比例乙腈（≥70%）混用时，可能发生盐析出。

4 ，开始进样前，用10-20倍柱体积的起始流动相条件进行平衡

5， 注意色谱柱的使用方向，反接有可能导致塌陷或污染

 

   使用后    

 

色谱柱的活化，平衡和再生。

详见图片，用最少的文字讲最全的内容。

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