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日常答疑:流动相中要用到的离子对试剂会伤害色谱柱,我可以通过将C18柱换成离子色谱柱解决吗?

日常答疑:流动相中要用到的离子对试剂会伤害色谱柱,我可以通过将C18柱换成离子色谱柱解决吗?

  • 分类:新闻中心
  • 作者:何必
  • 来源:原创
  • 发布时间:2022-06-06
  • 访问量:0

【概要描述】

日常答疑:流动相中要用到的离子对试剂会伤害色谱柱,我可以通过将C18柱换成离子色谱柱解决吗?

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客户原来方法里用的色谱柱是C18柱,流动相里有庚烷磺酸钠,想要换成阴离子色谱柱,不再用庚烷磺酸钠。这是不能通过更换色谱柱来解决问题的,理由我会写在下边。把日常沟通写成文章,一方面帮助客户了解相关内容,另一方面希望看到文章的朋友,如果有其他方案或者建议可以指教,谢谢哦~

离子对试剂

 

HPLC方法开发的时候会遇到一些这样的化合物:无论在酸性,中型,碱性流动相中都没有保留,这些化合物极性大、易电离,如强酸碱性化合物,或者一些有机盐。普通的流动相和色谱柱体系对这类化合物都没有保留,这个时候我们需要借助离子对试剂帮忙。

首先我们聊一下反相HPLC的分离原理:反相HPLC一般通过不同化合物在固定相和流动相之间的分配比不同,来达到分离效果。化合物在反相色谱体系中的保留,取决于两个因素:

1. 色谱柱

常用的反相色谱柱固定相有C18,C8,苯基等,这些固定相都是非极性或者弱极性的。根据同性相吸原则,非极性和弱极性的化合物更容易被色谱柱吸附,而极性大的物质更容易被流动相带走,这类化合物一般水溶性也很好,即使纯水作为流动相都有可能在死体积时间冲出来。
       2.流动相

通过改变流动相pH值可以抑制目标化合物电离,使目标化合物在流动相中以中性的分子形态存在。中性的分子形态极性较小,更容易被色谱柱固定相保留。但是对于一些很容易电离的化合物,调节流动相的pH值作用不大。对于这类化合物,我们需要需要通过添加离子对试剂让色谱柱固定相带上电荷。利用电荷的异性相吸原理,吸附和保留易电离的化合物。

 

离子对试剂的作用原理

离子对试剂一般由可离子化的终端和烷基链组成,以辛烷磺酸钠为例,添加在流动相中的离子对试剂,随流动相进入色谱柱,然后离子对试剂会在色谱柱的固定相和流动相之间达到平衡。吸附了辛烷磺酸根离子的色谱柱,固定相带上了负电荷,从而能吸附和保留带正电荷的化合物。除了提高色谱柱对目标化合物的保留能力。

离子对试剂还有一个作用是改善峰型。反相色谱柱的固定相硅胶表面会残留羟基,这些羟基和化合物相互作用会造成峰拖尾。离子对试剂填充到固定相的缝隙中,屏蔽硅胶表面残留的羟基,从而阻止了目标化合物和硅胶表面羟基相互作用,改善峰拖尾。


 

常用的离子对试剂

作用于酸性化合物:四丁基氢氧化铵, 四丁基氯化铵(四丁基溴化铵),十二烷基三甲基氯化铵

作用于碱性化合物:辛烷磺酸钠等各种烷基磺酸盐

 

离子对试剂的使用注意事项
1. 对色谱柱造成永久改性。大部分离子对试剂以盐为主,很难清洗干净。一般用离子对试剂的色谱柱都是专用,不建议和其他流动相混用。
2. 离子试剂体系重现性不是很好。离子对试剂本身没有缓冲能力,对pH敏感,系统中残留的酸和碱都会对体系造成影响。
3. 离子对试剂多为不挥发的盐,且很难冲洗干净。使用后容易产生离子对盐析出,损坏色谱柱。
4. 离子对试剂平衡时间较长。使用前需要对色谱柱平衡很长时间,梯度方法的平衡要求比较高。如果使用离子对试剂,建议首选挥发性离子对试剂,比如全氟取代的直链有机酸。

 

离子色谱

 

离子色谱IC系统的构成与HPLC系统相同,由流动相传送部分、分离柱、检测器和数据处理4个部分组成,在需要抑制背景电导的情况下通常还配有MSM或类似抑制器。

主要不同之处是:IC的流动相要求耐酸碱腐蚀,以及在可与水互溶的有机溶剂(如乙腈、甲醇和丙酮等)中不溶胀的系统。因此,凡是流动相通过的管道、阀门、泵、柱子及接头等均不宜用不锈钢材料,而是用耐酸碱腐蚀的PEEK材料的全塑IC系统。

此外,系统耐压,精密度以及检测器原理和应用范围等也是主要区别的方面。

 

综上所述,尽管使用离子对和离子色谱的分离原理相同,都是通过离子抑制进行吸附分离。但由于离子色谱柱需要的流动相是强酸强碱体系,系统内不宜用不锈钢材料;普通高效液相由于压力和泵精密度的要求,管路和溶剂系统多为不锈钢。所以色谱柱和仪器是不通用的。

有其他液相气相质谱相关的所有问题,都可以咨询我们,联系电话010-84766088或加微信HHAPPE

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