what is this
是什么
why is that
为什么
how to do
怎么做
01
溶液的制备✦
样品的制备同样是过滤和离心两种方法。离心的方法一般适用于过滤较困难的溶液,为了保护UPLC的系统,离心完毕后建议再次进行过滤。
流动相制备
所用有机相应是色谱级别。使用的水应为超纯水或纯净水。
配制缓冲盐溶液应该有效期的规定,根据各实验室SOP规定。
UPLC系统使用的所有流动相均必须经过0.22um的微孔滤膜过滤。
02色谱柱✦
色谱柱包装开启后一定要阅读说明书,关注说明书中的注意事项,如pH的适用范围、流动相中能否采用水、平衡时的流速,保留溶剂等。柱子开始使用前,必须确认系统适用性测试是否满足要求,主要关注理论板数、分离度、拖尾因子等关键分离参数,验收合格后才能使用。
清洗和保存
正相色谱柱进样后一般无需刻意清洗,但是需要保存时,必须按照说明书要求选择溶剂,以免长时间引起固定相干涸。
反相色谱柱清洗过程:高水相等度洗脱保证缓冲盐冲洗干净后,梯度洗脱的方式过渡到纯有机相,等度洗脱10~30柱体积,柱温可适当提高2~5度,方法运行完及时关闭柱温。
对于亲水作用色谱柱:最后保存尽量避免使用纯有机相,应包含少量的水,比如95%的乙腈。
使用
建立色谱柱的使用记录,记录中体现出理论板数、分离度拖尾因子、柱压、保留时间、流动相体系、保存溶剂等信息等。使用过程中,关注柱压、柱效,使用完毕后填写“色谱使用记录”。
03UPLC使用常见问题✦
确认方法:停泵,观察基线噪音是否正常,如果正常,则问题出在泵或流路的溶剂系统中;如果停泵后基线噪音不正常,则大概率是检测器光路问题,可以检查流通池是否洁净以及检测器灯能量是否合格。
排查流动相问题时,需要重点考虑流动相的组成及检测波长是否发生了改变,确定仪器最后使用的流动相是什么,仪器之前,最好连接两通,用超纯水将仪器管路全部清洗一遍。
液相压力波动
液相压力低
液相压力高
系统优化时所需过度溶剂
2.使用缓冲液后冲洗系统:水
3.冲洗系统:10%稀硝酸
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