样品的制备同样是过滤和离心两种方法。离心的方法一般适用于过滤较困难的溶液，为了保护UPLC的系统，离心完毕后建议再次进行过滤。

流动相制备

所用有机相应是色谱级别。使用的水应为超纯水或纯净水。

配制缓冲盐溶液应该有效期的规定，根据各实验室SOP规定。

 UPLC系统使用的所有流动相均必须经过0.22um的微孔滤膜过滤。

色谱柱包装开启后一定要阅读说明书，关注说明书中的注意事项，如pH的适用范围、流动相中能否采用水、平衡时的流速，保留溶剂等。柱子开始使用前，必须确认系统适用性测试是否满足要求，主要关注理论板数、分离度、拖尾因子等关键分离参数，验收合格后才能使用。

清洗和保存 

正相色谱柱进样后一般无需刻意清洗，但是需要保存时，必须按照说明书要求选择溶剂，以免长时间引起固定相干涸。

反相色谱柱清洗过程：高水相等度洗脱保证缓冲盐冲洗干净后，梯度洗脱的方式过渡到纯有机相，等度洗脱10~30柱体积，柱温可适当提高2~5度，方法运行完及时关闭柱温。

对于亲水作用色谱柱：最后保存尽量避免使用纯有机相，应包含少量的水，比如95%的乙腈。

使用

建立色谱柱的使用记录，记录中体现出理论板数、分离度拖尾因子、柱压、保留时间、流动相体系、保存溶剂等信息等。使用过程中，关注柱压、柱效，使用完毕后填写“色谱使用记录”。

03UPLC使用常见问题✦

确认方法：停泵，观察基线噪音是否正常，如果正常，则问题出在泵或流路的溶剂系统中；如果停泵后基线噪音不正常，则大概率是检测器光路问题，可以检查流通池是否洁净以及检测器灯能量是否合格。          

排查流动相问题时，需要重点考虑流动相的组成及检测波长是否发生了改变，确定仪器最后使用的流动相是什么，仪器之前，最好连接两通，用超纯水将仪器管路全部清洗一遍。

液相压力波动

 液相压力低

  液相压力高

系统优化时所需过度溶剂

 2.使用缓冲液后冲洗系统：水

 3.冲洗系统：10%稀硝酸

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